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双缩脲试剂由NaOH溶液(0.1g/mL)和CuSO4溶液(0.01g/mL)配制而成,配制比例为5:1。但是双缩脲试剂不用现配现用,先加入NaoH营造碱性环境,再加入CuSO4。这是与斐林试剂不同的地方。
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双缩脲试剂由NaOH溶液(0.1g/mL)和CuSO₄溶液(0.01g/mL)配制而成,配制比例为5:1。但是双缩脲试剂不用现配现用,先加入NaoH营造碱性环境,再加入CuSO₄。双缩脲反应主要涉及肽键,因此受蛋白质特异性影响较小。且使用
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两分子尿素(NH2-CO-NH2)加热至180℃左右生成双缩脲(NH2-CO-NH-CO-NH2)并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色配合物,此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键,其结构与双缩脲相似,也能
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双缩脲反应通常是用以测量肽和蛋白质的种颜色反应:一般含两个或更多肽键的化合物即可与碱性CuSO4溶液生成紫红色或蓝紫色的复合物,称为双缩脲反应。利用这个反应可测定蛋白质的含量。应用双缩脲反应、红外光谱分析及X线衍射法等均可证明蛋白质分子中肽键的存在,蛋白质分子中的多肽链可被酸、碱或蛋白酶水解成为氨基酸或分子较小的肽段,此方法在研究蛋白质的一级结构时常被采用。
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基(-CO-NH₂)、亚甲基(-CH₂-)、亚氨基(-NH-)、(-CS-CS-NH₂)等基团亦有此反应。值得注意的是,发生双缩脲反应,一般需要含有两个或两个以上的肽键(-CO-NH-),或与它类似的结构,二肽不能发生双缩脲反应 。例如,甘氨酰甘
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tcep还原二硫键的机理是其中心原子“P”所带的孤电子对能与氧原子形成配位共价结合而具有还原性。反应过程如下式所示:二硫键是2个巯基被氧化而形成的−S−S−形式的硫原子间的共价键,在蛋白质分子的立体结构形成上起着一定的重要作用。二硫键的
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,溶解后,加铜吡啶试液1mL,即显紫色或生成紫色沉淀。(2)反应原理①丙二酰脲类在碳酸钠试液中形成钠盐而溶解,再与硝酸银试液反应,先生成可溶性的一银盐,再生成不溶性的二银盐沉淀。②丙二酰脲分子中具有—CONHCONHCO—的结构,与铜盐作用,产生类似双缩脲的显色反应,与吡啶和硫酸铜作用,显紫色。
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实验原理具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应。在碱性溶液中双缩脲与铜离子结合形成复杂的紫好色复合物。而蛋白质及多肽的肽键与双缩脲的结构类似,也能与Cu2+形成紫红色络合物,其最大光吸收在540nm处。其颜色深浅与蛋白质浓度成正比
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二硫键最重要的一个特性就是它在还原剂作用下的裂解。使二硫键裂解的还原剂较多。在生物化学中,常用的还原剂有硫醇如β-巯基乙醇(β-mercaptoethanol,β-ME)或二硫苏糖醇(DTT)。通常要使用过量硫醇试剂保证二硫键的完全裂解
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双缩脲(NH2CONHCONH2)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中,双缩脲与二价铜离子形成紫色络合物,称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键,或能够以一个中间碳原子相连的肽键